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大鼠活性氧 (ROS)elisa试剂盒 /Rat Reactive OXyen Species,ROS ELISA Kit

BPE30810 Catalogue No.
48/96T
1380.00-2580.00
30-4800U/ml
30U/ml
批间差:CV<12%
批内差:CV<10%

活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)广泛指代氧来源的自由基和非自由基,包含了超氧阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、羟自由基(OH-)、臭氧(O3)和单线态氧(1O2),由于它们含有不成对的电子,因而具有很高的化学反应活性。
在机体内,ROS的主要来源之一是线粒体内膜的呼吸链底物端,在线粒体中的电子传递链复合物将电子传递给O2的过程中,有一部分O2被还原,形成O2-或H2O2。其中,***为重要的是O2-,它是大部分的ROS的前体。另一个ROS的重要来源是NADPH化酶,这些酶能通过质传递电子产生ROS。

1.实验原理:

本试剂盒采用竞争法(间接法)检测样本中活性氧簇(reactive  oxygen  species,ROS)的含量。向预先包被了相关抗体的酶标孔中加入样本,再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原,在37℃下孵育1小时,两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物,经PBST洗涤后,结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色,随后在酸的作用下转化成黄色,在450nm波长下有吸收峰,吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。

无标题.jpg

2.试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


密封袋

1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

标准品:9600U/ml

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

标准品/样品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×25倍)×1瓶

(20ml×25倍)×1瓶

2-8℃保存

3.试剂盒保存

本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月,在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装,板条可以拆卸,拆开以后如一次不能用完,请放入提供的密封袋中,放入干燥剂,2-8℃保存,在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。

4.需要而未提供的试剂和器材

1.37℃恒温箱                        2.标准规格酶标仪。

3.精密移液器及一次性吸头   4.双蒸水或超纯水

5.干净的试管或Eppendof管  6.吸水纸

7.自动洗板机或8道排枪         8.ELISA数据处理软件,推荐使用ELISACalc

9.500ml烧杯的和适当量程的量筒

5.试剂准备

a.     使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。

b.     本试剂盒可以直接加样,如浓度过高,可以进行适当比例的稀释(推荐2-5倍稀释),计算时应将结果乘以稀释的倍数。

c.      洗涤液为25倍浓缩液,使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中,用双蒸水定容到500ml即为工作液。

d.     标准品的稀释:取5支干净的Eppendorf管,每管加150μl的标准品稀释液,分别标记上4800U/ml  ,2400U/ml , 1200U/ml ,600U/ml ,300U/ml .取150μl标准品原液加入标记4800U/ml  的管中,混匀后同样取出150μl,加入下一管,以此类推直至***一管。零孔:直接加标准品/样品稀释液。(见下图)

无标题1.jpg

原液9600U/ml  4800U/ml  2400U/ml  1200U/ml  600U/ml  300U/ml 

 

6.详细操作程序

a.     使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

b.     空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。

c.      标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入酶标试剂50μl。

d.     样品孔:加入样品50μl(推荐直接加样,浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍),然后加入酶标试剂50μl。

e.      轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育60min。

f.       将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

g.     洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

h.     显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

i.       终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

j.       测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。

k.     计算:根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。标曲示意图如下:无标题2.jpg




BPE11725    人活性氧 (ROS)elisa试剂盒    Human Reactive OXyen Species,ROS ELISA Kit 30-4800U/ml
BPE20895    小鼠活性氧(ROS)ELISA Kit    Mouse  reactive oxygen species,ROS ELISA Kit 30-4800U/ml
BPE30810    大鼠活性氧 (ROS)elisa试剂盒    Rat  Reactive OXyen Species,ROS ELISA Kit 30-4800U/ml
BPE60823    鸡活性氧(ROS)ELISA Kit     Chicken ROS ELISA Kit 30-4800U/ml
BPE92203    牛活性氧 (ROS)elisa试剂盒    bovine  ROS  ELISA Kit 30-4800U/ml
BPE94024    植物活性氧 (ROS)elisa试剂盒    Plant  ROS  ELISA Kit 20-3200U/ml
BPE94157    鱼活性氧 (ROS)elisa试剂盒    Fish Reactive OXyen Species (ROS) ELISA Kit  4-640U/ml
BPET333    软体动物活性氧 (ROS)elisa试剂盒    Molluscs Reactive OXyen Species,ROS ELISA Kit 4-640U/ml

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