植物硝态氮测定试剂盒（微量法）

自备实验用品及仪器                                                     

蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

试剂组成和配制                                                        

试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加1.2mL浓硫酸充分溶解。

试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1支，4℃保存。

样本处理                                                                 

按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g离心15min，取上清待测。（深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取）

测定操作表                                                              

1、  分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、  在EP管中如下表加样

注意：空白管只需测定一次。

计算公式                                                               

a.       用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V样总）

                =64.1×（△A-0.0073）÷W

V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

b.       用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V样总）

                =128.2×（△A-0.0073）÷W

V样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

注意事项                                                                

1.       试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。

2.       试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

3.       最低检出限为2μg/g。