小鼠血清总胆红素（TBIL）ELISA Kit/Mouse total bilirubin, TBIL ELISA Kit
- 48/96T
- 1380.00-2580.00
- 总胆红素（TBIL）,ELISA,试剂盒
- 0.18-28.8μmol/L
- 批间差：CV＜12%
- 批内差：CV＜10%
总胆红素（Total bilirubin,TBIL）是直接胆红素和间接胆红素的总和。间接胆红素是指不与葡糖醛酸结合的胆红素。间接胆红素难溶于水，不能通过肾随尿排出。间接胆红素在肝细胞内转化，与葡萄糖醛酸结合形成直接胆红素（结合胆红素）。直接胆红素溶于水，能通过肾随尿排出体外。肝脏对胆红素的代谢起着重要作用，包括肝细胞对血液中未结合胆红素的摄取、结合和排泄三个过程，其中任何一个过程发生障碍，均可引起胆红素在血液中积聚，出现黄疸。
本试剂盒采用竞争法(间接法)检测样本中总胆红素（Total bilirubin,TBIL）的含量。向预先包被了相关抗体的酶标孔中加入样本，再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原，在37℃下孵育1小时，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤后，结合的HRP催化TMB（四甲基联苯胺）成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
3.试剂盒组成：
试剂盒组成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片（48） | 2片（96） | |
密封袋 | 1个 | 1个 | |
酶标包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
标准品：57.6μmol/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
标准品/样品稀释液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶标试剂 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂A液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
显色剂B液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
终止液 | 3ml×1瓶 | 6ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
浓缩洗涤液 | （20ml×25倍）×1瓶 | （20ml×25倍）×1瓶 | 2-8℃保存 |
备注：a． 试剂盒中“样品稀释液”为0.05M的PBS，“终止液”为2M的H2SO4，洗涤液为含0.15%吐温-20的PBST，如不够可自行配制。
b.不同公司的缓冲体系存在较大差异，请勿将本试剂盒的试剂与其他公司的试剂混用以免影响实验结果。
c.浓缩洗涤液在低温下会有少量盐类析出，稍微加温后即会消失，不影响使用。
4.试剂盒保存
本试剂盒可以在2-8℃下保存6个月，在-20℃下可以保存更长的时间。酶标板为真空包装，板条可以拆卸，拆开以后如一次不能用完，请放入提供的密封袋中，放入干燥剂，2-8℃保存，在一个月之内仍然有效。试剂不能反复冻融。
5．需要而未提供的试剂和器材
1．37℃恒温箱。
2．标准规格酶标仪。
3．精密移液器及一次性吸头
4．双蒸水或超纯水
5．干净的试管或Eppendof管
6．吸水纸
7．自动洗板机或8道排枪
8．ELISA数据处理软件，推荐使用ELISACalc
9．500ml烧杯的和适当量程的量筒
6.试剂准备
a. 使用前所有试剂应置于室温平衡至少30分钟。
b. 本试剂盒可以直接加样，如浓度过高，可以进行适当比例的稀释（推荐2-5倍稀释），计算时应将结果乘以稀释的倍数。
c. 洗涤液为25倍浓缩液，使用前将所有洗涤液倒入500ml或1L的烧杯中，用双蒸水定容到500ml即为工作液。
d. 标准品的稀释：取5支干净的Eppendorf管，每管加150μl的标准品稀释液，分别标记上28.8μmol/L ,14.4μmol/L ,7.2μmol/L ,3.6μmol/L ,1.8μmol/L .取150μl标准品原液加入标记28.8μmol/L 的管中，混匀后同样取出150μl，加入下一管，以此类推直至最后一管。零孔：直接加标准品/样品稀释液。（见下图）
原液57.6μmol/L 28.8μmol/L 14.4μmol/L 7.2μmol/L 3.6μmol/L 1.8μmol/L
7.样本前处理
a.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
b.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
c.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
d.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
e.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
f.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
8.洗板方法
a. 手工洗板：先洗去酶标孔中的的液体，在吸水纸上拍干，然后每孔加入300μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30秒，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4-5次。
b. 洗板机洗板：洗板机洗板比较便捷，但应操作熟练后使用。
9.详细操作程序
a. 使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
b. 空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。
c. 标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入酶标试剂50μl。
d. 样品孔：加入样品50μl（推荐直接加样，浓度高可以用样品稀释液稀释2-5倍），然后加入酶标试剂50μl。
e. 轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育60min。
f. 将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
g. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
h. 显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
i. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
j. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
计算：根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用专用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。
