谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒
- 规格：50/100T
- 330.00/450.00
1.原理
GSH-PX在有GSH存在时，可清除过氧化物如过氧化脲，同时消耗GSH。DTNB时一种可被GSH还原的二硫化物，DTNB被GSH还原后，变成一种淡黄色的化合物，在412nm处有吸收峰，可通过测定DTNB被还原的量而估计GSH的消耗，以GSH的消耗量可推算GSH-PX的活性。
2. 测定意义
谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxide，简称GSH-PX),是 一种含硒酶，几乎在动物的所有组织中都含有GSH-PX，尤其在肝和红细胞中的活性最高，GSH-PX的亚细胞分布主要是在细胞的包浆（75%）和线粒体基质（25%）中。
GSH-PX作为细胞内的一种抗氧化酶，和超氧化物歧化酶、过氧化氢酶一起，通过清除O2-和H2O2以减轻和阻断膜脂质的过氧化。在一些病理过程诸如辐射损伤、缺血、缺氧、中毒、炎症以及衰老，吞噬杀菌等生理过程中，GSH-PX都起着重要的作用。
3.测试所需仪器设备及自备试剂
可见光分光光度计,恒温水浴锅,离心机, 漩涡混匀器，精密移液器，试管。
4.适用范围
本试剂盒可测定动物血清、血浆、组织以及全血、血细胞中的GSH-PX的活力。
5.试剂及配置
试剂 | 50T | 100T | |
试剂1： | 25ml*1瓶,用于稀释试剂2以及配制标准品 | 50ml*1瓶, 用于稀释试剂2以及配制标准品 | |
试剂2 | 粉剂3.07mg*2支，试剂2用10ml试剂1溶解，得到1mmol/LGSH溶液，现配现用 | 粉剂3.07mg*4支，试剂2用10ml试剂1溶解，得到1mmol/LGSH溶液，现配现用 | |
试剂3 | 5ml*1瓶 | 10 ml *1瓶 | |
试剂4 | 100ml*1瓶 | 100ml*2瓶 | |
试剂5 | 7.5ml*1瓶，用时定容到75ml | 15ml*1瓶，用时定容到150ml | |
试剂6 | 5mg*1支，用试剂7稀释成为显色液 | 10mg*1支，用试剂7稀释成为显色液 | |
试剂7 | 50ml*1 | 100ml*1 | |
6.样本处理
（1）血清（浆）：直接加样。
（2）组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度。
（3）红细胞溶血液：大鼠麻醉以后，腹主动脉取血（以0.05%肝素抗凝），2000rpm离心10min，吸弃上清液，用3倍于原血量的冰冷生理盐水重复洗3次，弃上清液，加10倍体积的双蒸水溶血，然后再用PBS稀释10倍（1:99溶血液），置冰箱内备用。
7. 操作步骤
（1）酶促反应 | ||
试剂 | 测定管 | 对照管 |
试剂2（ml） | 0.25 | 0.25 |
测定样品（ml） | 0.05 | |
试剂1（ml） | 0.1 | 0.15 |
37℃水浴预温5min
试剂3 | 0.1 | 0.1 |
37℃水浴孵育5min
试剂4 | 2 | 2 |
2000r/min离心10min，取上清液1ml作显色反应
(2)显色反应
空白管 | 标准管 | 测定管 | 对照管 | |
20μmol/L GSH标准溶液 | 1 | |||
标准品稀释液 | 1 | |||
上清液 | 1 | 1 | 1 | |
试剂5 | 1.25 | 1.25 | 1.25 | 1.25 |
显色液 | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
混匀，，静置15min，在412nm波长下，双蒸水调零，测定吸光值
