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常见样本采集方法及注意事项

2005-01-21


一、液体样本 

液体样本处理原则:所有的液体样本,用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),如果以后遇到其他的液体样本,也按这个方法,纳入汇总表。


1、血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2、血浆:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3、尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

4、胸腹水:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5、脑脊液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

6、唾液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

7、细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

8、牛奶:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

9、蜂蜜:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。10、全血:用含有抗凝剂的无菌管收集,立即轻轻摇动,来回轻轻颠

倒数次,使血液和抗凝剂混匀,以防血液凝固。


二、固体样本 

固体样本处理原则:称取1g的固体样本,用9g的合适缓冲液溶解,分泌蛋白可以直接离心取上清检测,细胞内的蛋白,要先收集细胞,再用合适方法破碎,离心取上清测试


1、组织标本:切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存

过程中如有沉淀形成,应再次离心。对于植物组织,不好匀浆的话,就在液氮中充分研磨;

2、细胞内蛋白样本许多待测蛋白不是分泌蛋白,而是存在于细胞内的蛋白,这个时候,要先收集细胞,洗涤干净,再破碎细胞,离心取上清。(1)培养的细胞A、动物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬

液,使细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融(如果反复冻融,破碎效果不好,就采用超声波破碎),以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上

清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。B、植物细胞:用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液,使细胞浓度达到100万/ml左右,置于冰盒上,用超声破碎仪,设置破碎2s,冷却30s的方式,充分破碎细胞,

以使细胞破坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。(2)组织的细胞切割标本后,称取1g组织,加入9g的pH7.2-

7.4左右的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),去除上清,再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗涤沉淀的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。

3、土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀

形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

4、咽拭子:加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS,溶解咽拭子头部,摇匀,用镊子取出咽拭子并挤干液体,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保

存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

5. 植物标本的精采集及保存1、称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本,在液氮中充分研磨;2、加入1ml的提取液(80%甲醇),置于-20度过夜;3、于4度,8000rpm,离心1小时,取上清;4、上清

液过C-18固相萃取柱。具体步骤是:80%甲醇(1ml)平衡柱上样收集样品移开样品后用100%甲醇(5ml)洗柱100%乙醚(5ml)洗柱100%甲醇(5ml)洗柱循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存

备用;5、上样前加入pH7.4PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,然后4度离心(8000rpm,15分钟),取上清并暂时保存于4度待用。


三.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)

1、新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;

2、加入样品体积9倍的提取液(pH7.4PBS缓冲液);

3、请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。


四、样本收集注意事项

1、不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。2、标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。


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